一級(jí)生物安全柜只可保護(hù)工作人員和環(huán)境而不保護(hù)樣品。其原理和實(shí)通分柜類似，但是安全柜的排氣口安裝有安裝過濾器。所生物安全柜在排氣和進(jìn)氣口都需要使用過濾器。一級(jí)生物安全柜本身沒有風(fēng)機(jī)，依靠外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶動(dòng)氣流，但是因?yàn)橐患?jí)生物安全柜保護(hù)樣品，如今已鮮少有人使用。

二級(jí)B型生物安全柜都是連接排氣系統(tǒng)的安全柜。連接安全柜排氣導(dǎo)管的風(fēng)機(jī)連接緊急供應(yīng)電源，在斷電下仍可保持安全柜處于負(fù)壓狀態(tài)，不會(huì)市危險(xiǎn)氣體泄漏出實(shí)驗(yàn)室。

三級(jí)生物安全柜是為4級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)而設(shè)計(jì)的，是目前安全防護(hù)等級(jí)最高的安全柜。柜體完全氣密，全排放式，一切氣體都不參與循環(huán)，工作人員則是通過連接在柜體的手套進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的，即手套箱，樣品通過雙門的傳遞箱進(jìn)出安全柜以確保不受污染，適用于高風(fēng)險(xiǎn)的生物試驗(yàn)。

生物安全柜的工作原理主要是將柜內(nèi)空氣向外抽吸，使柜內(nèi)保持負(fù)壓狀態(tài)，通過垂直氣流來保護(hù)工作人員；外界空氣經(jīng)高效空氣過濾器過濾后進(jìn)入安全柜內(nèi)，以避免處理樣品被污染；柜內(nèi)的空氣也需經(jīng)過HEPA過濾器過濾后再排放到大氣中，可以有效的保護(hù)環(huán)境。